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怎么使用熒光生物顯微鏡,并記錄圖像?

更新時(shí)間:2020-01-06 點(diǎn)擊量:3066
  熒光生物顯微鏡是由倒置顯微鏡和落射熒光顯微鏡組成,儀器配有長(zhǎng)工作距離平場(chǎng)消色差物鏡、大視野目鏡。倒置觀察時(shí)配置長(zhǎng)工作距離平場(chǎng)相襯物鏡和帶相襯裝置的特長(zhǎng)工作距離聚光鏡,熒光觀察時(shí)可進(jìn)行激發(fā)濾色片組切換。
 
  該儀器具有成像清晰,視場(chǎng)廣闊,結(jié)構(gòu)緊湊,造型美觀,操作舒適等特點(diǎn),主要適用于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)活體細(xì)胞和組織、流質(zhì)、沉淀物等顯微觀察,也可應(yīng)用于未染色透明活體和熒光切片的熒光顯微觀察。是生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)等研究工作的理想儀器??晒┛蒲性核?、醫(yī)療、防疫和農(nóng)牧等部門使用。
 
  配置特點(diǎn):
 
  配置熒光裝置,帶有四組熒光濾光片組;
 
  配置相襯裝置,包括特長(zhǎng)工作距離相襯聚光鏡;
 
  配置長(zhǎng)工作距離平場(chǎng)消色差物鏡,視場(chǎng)平坦而且清晰;
 
  兩路光路輸出,一路用于觀察,一路用于連接攝像裝置;
 
  采用帶有刻度標(biāo)尺的雙層機(jī)械載物臺(tái),同軸縱橫向調(diào)節(jié)手輪,操作更靈便;
 
  采用粗微動(dòng)同軸調(diào)焦機(jī)構(gòu),粗動(dòng)松緊可調(diào),帶鎖緊和限位裝置,載物臺(tái)的移動(dòng)機(jī)構(gòu)可拆卸。
 
  使用方法與注意事項(xiàng)
 
  使用方法:
 
  (1)將物料板放在舞臺(tái)上。
 
  (2)打開調(diào)節(jié)器熒光顯微鏡。然后按下啟動(dòng)一套UV燈不能接近15分鐘內(nèi)點(diǎn)燃,后收盤不能重新啟動(dòng)3分鐘。
 
  (3)將激勵(lì)濾波器轉(zhuǎn)換為V,將分色器調(diào)整為V,選擇495或475nm阻塞濾波器。
 
  (4)使用uvfl40、uvfl100螢光鏡檢查。
 
  (5)將非熒光油加入到載玻片上,首先使用40X,然后用100X聚焦檢測(cè)熒光。
 
  (7)由于在由隨時(shí)間推移的UV熒光增加照射熒光物質(zhì)逐漸減弱,因此應(yīng)不斷變化的視野檢查。
 
  (8)紫外FL10或紫外FL20也可用作低倍材料(使用低倍顯微鏡時(shí)不加熒光油)。
 
  熒光圖像的記錄方法:
 
  觀察到的熒光圖像具有形態(tài)特征,具有熒光顏色和亮度。在判斷結(jié)果時(shí),必須結(jié)合起來(lái)作出的判斷。結(jié)果是根據(jù)主觀指標(biāo),即工人的眼睛來(lái)記錄的。作為一般的定性觀測(cè),它基本上是的。隨著科技的發(fā)展,客觀指標(biāo)被用來(lái)記錄判斷結(jié)果,如使用細(xì)胞分光光度計(jì)、圖像分析儀等儀器。但是,這些文書所記錄的結(jié)果也必須與主觀判斷相結(jié)合。
 
  熒光生物顯微鏡攝影對(duì)于記錄熒光圖像是非常必要的。由于熒光容易褪色和減弱,因此有必要對(duì)實(shí)時(shí)照相的結(jié)果進(jìn)行記錄。該方法與普通顯微攝影方法基本相同。只需使用高速光敏膜,如ASA 200或以上或24。上面。由于紫外光對(duì)熒光的猝滅效應(yīng)很大,如熒光標(biāo)記物FITC等,在紫外光照射30s時(shí),熒光亮度下降了50%,因此曝光速度太慢,無(wú)法捕捉到熒光圖像。一般研究型產(chǎn)品有半自動(dòng)或全自動(dòng)顯微攝影系統(tǒng).
 
  注意事項(xiàng):
 
  (1)嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書的要求制造的熒光顯微鏡,不改變?cè)摮绦颉?br /> 
  (2)檢查應(yīng)在暗室進(jìn)行。進(jìn)入暗室后,接通電源,點(diǎn)燃超高壓汞燈5-15分鐘。當(dāng)光源發(fā)出強(qiáng)光并穩(wěn)定下來(lái)時(shí),眼睛有效適應(yīng)暗室,然后開始觀察標(biāo)本。
 
  (3)為防止紫外線對(duì)眼睛造成損害,調(diào)節(jié)光源時(shí)戴防護(hù)眼鏡。
 
  (4)每次檢查時(shí)間為1~2h,超過(guò)90min,超高壓汞燈的發(fā)光強(qiáng)度逐漸降低,熒光降低;紫外線照射3~5分鐘后熒光降低。因此,不超過(guò)2~3h。
 
  (5)檢查應(yīng)聚焦在試樣上,為了節(jié)省時(shí)間,保護(hù)光源。天熱時(shí),冷卻風(fēng)扇應(yīng)添加,更換燈泡應(yīng)該開始新的記錄時(shí)間。后燈可以點(diǎn)亮,然后熄滅是,受燈充分冷卻。每日數(shù)次,以避免火源。
 
  (6)染色后,熒光會(huì)隨著時(shí)間逐漸減弱。當(dāng)試樣在4℃下存放在聚乙烯塑料袋中時(shí),可延遲熒光衰減時(shí)間,防止密封劑蒸發(fā)。
 
  (7)熒光亮度的確定標(biāo)準(zhǔn):一般分為四個(gè)級(jí)別,即"1"-NO或可見弱熒光。"++"-只能看到明顯可見的熒光。"(+)+"-可見且明亮。
 

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